ВЫЯВЛЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ТИЛЯПИИ В РЫБНОЙ ПРОДУКЦИИ МЕТОДОМ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ

Разработана методика детекции и полуколичественной оценки наличия тиляпии в рыбной продукции с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с целью выявления фактов подмены тиляпией более ценных и дорогих видов рыбы. Методика основана на применении мультиплексной ПЦР для выявления фрагмента гена родопсина специфичного для тиляпий родов Oreochromis, Sarotherodon и Coptodon, с одновременной амплификацией внутреннего эндогенного контроля. Проведено сравнение методов экстракции ДНК из нескольких видов рыбной продукции. Показано, что для выделения ДНК могут использоваться преципитационный и сорбционные методы экстракции, а экспресс-метод можно использовать для выделения ДНК из образцов однокомпонентной продукции (фарши и филе) в целях сокращения временных затрат на исследование. При исследовании контрольной панели образцов ДНК различных видов рыб методика показала 100 % специфичность. Предел абсолютной чувствительности методики выявления генетического материала тиляпий составил 200 копий на реакцию. Предел обнаружения составил 0,05 %_масс.
Методика апробирована при тестировании 83 образцов однокомпонентной и 28 образцов многокомпонентной рыбной продукции, отобранных из различных торговых точек г. Москвы и Московской области. В двух образцах выявлена ДНК тиляпий, не заявленная в составе продукции. Доля выявленной ДНК тиляпии находилась в пределах 0,1– %_масс, что может свидетельствовать о случайной контаминации при производстве. На этом основании существующие требования к маркировке рыбной продукции нуждаются в уточнении в связи с допустимостью подобных примесей. Предложенная методика может использоваться для контроля правильности маркировки рыбной продукции.

1. Report: Operation OPSON V 2015 / Interpol-Europol, 2016 [Электронный ресурс]. – URL: https://www.europol.europa.eu/sites/default/files/documents/report_opson_v.pdf (дата обращения 16.04.2024).

2. Ropicki A.J., Larkin S.L., Adams C.M. Seafood substitution and mislabeling: WTP for a locally caught grouper labeling program in Florida // Mar. Resour. Econ. – 2010. – Vol. 1, № 25. – P. 77–92.

3. Warner K., Timme W., Lowel B. Widespread Seafood Fraud Found in New York City: report / Oceana (non-profit group) [Электронный ресурс]. – NY, 2012. – URL: https://oceana.org/wp-content/uploads/sites/18/Oceana_NYC_Seafood_Fraud_Report_FINAL.pdf (дата обращения 16.04.2024).

4. Focardi S. Levels of mercury and polychlorobiphenyls in commercial food in Siena Province (Tuscany, Italy) in the period 2001–2010 // Microchem. J. – 2012. – Vol. 105. – P. 60–64.

5. Günther B., Raupach M.J., Knebelsberger T. Full-length and mini-length DNA barcoding for the identification of seafood commercially traded in Germany // Food Control. – 2017. – Vol. 73, Part B. – P. 922–929.

6. DNA barcoding of fish species reveals low rate of package mislabeling in Qatar / Chen K.C. [et al.] // Genome. – 2019. – Vol. 62, № 2. – P. 69–76.

7. О качестве и безопасности пищевых продуктов: федер. закон от 02.01.2000 № 29-ФЗ [Электронный ресурс]. – URL: https://www.consultant.ru/document/cons_doc_LAW_25584/ (дата обращения 16.04.2024).

8. О безопасности рыбы и рыбной продукции: технический регламент Евразийского экономического союза ТР ЕАЭС 040/2016 [Электронный ресурс]. – URL: https://mskstandart.ru/upload/file/040-2016_o_bezopasnosti_rybnoy_produccii.pdf (дата обращения 16.04.2024).

9. Пищевая продукция в части ее маркировки / технический регламент Таможенного союза ТР ТС 022/2011 [Электронный ресурс]. – URL: https://mskstandart.ru/upload/file/022-2011-markirovka.pdf (дата обращения 16.04.2024).

10. При проверке склада консервного завода в городе Москве выявлена фальсификация рыбной продукции // Региональные новости федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Россельхознадзора (14 ноября 2023 г.) [Электронный ресурс]. – URL: https://fsvps.gov.ru/news/pri-proverke-sklada-konservnogo-zavoda-v-gorode-moskve-vyjavlena-falsifikacija-rybnoj-produkcii/ (дата обращения: 23.04.2024).

11. Об обороте фальсифицированной рыбной продукции // Новости «ФБУЗ Центр гигиены и эпидемиологии в Тульской области» (14 декабря 2022 г.) [Электронный ресурс]. – URL: https://71.rospotrebnadzor.ru/content/475/116251/ (дата обращения: 23.04.2024).

12. Ликарчук Ю. Россельхознадзор зафиксировал всплеск фальсификации рыбной продукции // Информационный портал Ветеринария и жизнь [Электронный ресурс]. – URL: https://vetandlife.ru/sobytiya/rosselhoznadzor-zafiksiroval-vsplesk-falsifikacii-rybnoj-produkcii/ (дата обращения: 23.04.24).

13. Spencer E.T, Bruno J.F. Fishy Business: Red Snapper Mislabeling Along the Coastline of the Southeastern United States // Frontiers in Marine Science. – 2019. – Vol. 6, Art. 513.

14. A high proportion of red snapper sold in North Carolina is mislabeled / E.T. Spencer [et al.] // PeerJ. – 2020. – Vol. 8, Art. e9218.

15. Wong H. K., Hanner R. H. DNA barcoding detects market substitution in North American seafood // Food Research International. – 2008. – Vol. 41. – P. 828–837.

16. Molecular barcoding reveals mislabelling of commercial fish products in Italy / L. Filonzi [et al.] // Food Research International. – 2010. – Vol. 43, No. 5. –P. 1383–1388.

17. ГОСТ 34106-2017 Продукция пищевая и сырье. Метод секвенирования фрагментов митохондриального генома животных и рыб для определения видовой принадлежности в однокомпонентной продукции [Электронный ресурс]. – URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/64819/ (дата обращения 16.04.2024).

18. ГОСТ 31719-2012 Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный) [Электронный ресурс]. – URL: https://internet-law.ru/gosts/gost/52868/ (дата обращения 16.04.2024).

19. IDT OligoAnalyzer [Электронный ресурс]. – URL: https://www.idtdna.com/calc/analyzer (дата обращения 16.04.2024).

20. Выбор последовательностей для внутреннего контроля для использования в ПЦР-методиках определения видовой принадлежности компонентов пищевой продукции / А.В. Путинцева, Н.А. Кирсанова, О.О. Леухина, Е.В. Крылова // Наука молодых – будущее России: сб. ст. 7-й Междунар. науч. конф. перспективных разработок молодых ученых (Курск, 12–13 декабря, 2022 г.). – Курск, 2022. – С. 328–331.

21. Качественное выявление генетического материала тиляпий в однокомпонентной рыбной продукции / А.Д. Козлова, М.С. Красникова, Н.С. Горбачева [и др.] // Молекулярная диагностика 2023: сб. тр. XI междунар. науч.-практ. конф. (Москва, 14–16 ноября 2023 г.). – М.: АО «СМП», 2023. – С. 372–373.